Exemples d'utilisation de Primase en Français et leurs traductions en Danois
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(A) formation d'apprêt d'ARN catalysé par la primase d'ADN de T7.
Ajouter 2'L de 16'M T7 ADN primase, spin down, mélanger doucement, et spin vers le bas à nouveau.
Figure 1: Représentation schématique du profilage primase à haut débit(HTPP).
Par exemple, la primase de Mycobacterium tuberculosis nécessite la substitution du magnésium par du manganèse divalent dans le tampon de réaction.
Reconnaissance de séquence d'ADN par primase d'ADN utilisant le profilage primase à haut débit.
Les résultats démontrent une corrélation entrel'affinité ADN- contraignante et la quantité d'ARN synthétisé par la primase d'ADN de T7.
Cette méthode, désignée comme profilage primase à haut débit(HTPP), peut être utilisée pour révéler les modèles de liaison de l'ADN d'une variété d'enzymes.
Des cofacteurs métalliques inappropriés oudes tampons de réaction inappropriés peuvent entraîner une mauvaise activité de primase ou une diminution de l'affinité de liaison de l'ADN.
Par exemple, il a été observé que si primase présente une plus grande affinité de liaison pour le modèle d'ADN, il catalyse la formation d'amorces d'ARN plus longues(processusivité accrue).
La nouvelle technologie a été appliquée pour revoir notre compréhension des sites de reconnaissance primase, même pour la primase de l'ADN T7 qui a fait l'objet d'études approfondies5.
(B) Des essais biochimiques ont été effectués pour corréler les résultats de liaison de l'ADN obtenus à partir de l'expérience de microarray, avec les propriétés fonctionnelles de la primase d'ADN T7.
Les outils classiques utilisés pour déterminer les sites de reconnaissance primase n'ont pas la capacité de produire une quantité massive de données, alors que le PTDH le fait.
Une telle approche à haut débit permet de déterminer, de manière systématique, quantitative et hypothétique,les propriétés liées à la séquence qui sont importantes pour la liaison primase et son activité enzymatique3.
Figure 2: Comparaison de l'activité catalytique de la primase de l'ADN T7 sur deux groupes de modèles d'ADN(forte liaison avec T/G sur les flancs et faible liaison avec A/G sur les flancs) obtenue à partir de PBM.
(B) Longueur relative(nombre de ribonucléotides constituant chaque amorce d'ARN est inconnue) etquantité d'amorces d'ARN synthétisées par primase d'ADN T7 sur deux groupes de modèles d'ADN(panneau A).
Cette méthode combine PBM et primase activity test et est désigné comme profilage primase à haut débit(HTPP), et il permet la caractérisation de la reconnaissance de séquence spécifique par primase de l'ADN dans un temps et une évolutivité sans précédent.
Les expériences de microréseau de liaison protéique(PBM)combinées à des essais biochimiques relient les propriétés de liaison et catalytiques de la primase de l'ADN, une enzyme qui synthétise les amorces d'ARN sur l'ADN modèle.
Le HTPP utilise la technologie de microréseau de liaison de l'ADN combinée à l'analyse biochimique(Figure 1)pour identifier statistiquement les caractéristiques spécifiques des modèles d'ADN qui affectent l'activité enzymatique de la primase de l'ADN.
Les parcelles montrent que les amorces d'ARN plus longues sont synthétisées(processusivité accrue)sur des modèles d'ADN que primase lie avec une affinité plus élevée(qui contiennent T/G dans les flancs) par rapport aux modèles qui sont liés avec une affinité plus faible(qui contiennent A/G dans les flancs).
La méthode PBM a été largement utilisée pour étudier les propriétés de liaison des facteurs de transcription etpeut également être appliquée aux enzymes de traitement de l'ADN, telles que la primase de l'ADN, qui se lient à l'ADN avec une faible affinité.
À l'aide d'un test de liaison à haut débit à base de microarray et d'analyses biochimiques consécutives, il a été démontré que 1 le contexte de liaison spécifique(séquences de liaison du site de reconnaissance) influence la force de liaison de la primase de l'ADN à son modèle L'ADN, et2 la liaison plus forte de primase à l'ADN donne des amorces plus longues d'ARN, indiquant une plus grande processivité de l'enzyme.