Voorbeelden van het gebruik van Dapi in het Spaans en hun vertalingen in het Nederlands
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DAPI había etiquetado el núcleo(B, D).
Los núcleos se contraen con DAPI.
DAPI se utilizó para manchar los núcleos.
Una diapositiva debe contener sólo DAPI.
De campo claro(BF) y las imágenes Dapi de los condrocitos articulares humanos culturas encapsulado con 0%, 30%, 50%, 70% y 100% del líquido sinovial.
Los núcleos se counterstained con DAPI.
Sin embargo, la fragmentación del ADN, observó tanto con H& E(figuras 2A,2B) y DAPI(datos no mostrados), es aparente en el miocardio compacto y alrededor de los grandes vasos.
Los núcleos se han contrastado con DAPI.
Canales de tinción son pseudo colores mediante el panel de canal(1)canales de tinción(YFP LGALS3 ACTA2, DAPI para tinción nuclear y DIC) se combinan con el panel de canales de mezcla(2).
Por último(Figura 4P), la matriz tiene una calidadespecial de fluorescencia en la misma longitud de onda que Dapi.
Añadir otras manchas según sea necesario, por ejemplo, 5 mM de germende trigo agglutinnin(WGA) conjugado con Alexa 647 o DAPI según la recomendación del fabricante, durante 1 hora a temperatura ambiente.
NOTA: Aunque las concentraciones más altas de HCl(por ejemplo, 4 N) conducen a un desnaturalizante del ADN más eficiente,que no son compatibles para la co-detección de oxi-MCS con DAPI.
Descubrimos que tanto el miocardio comoel tejido lesionado contenían numerosas células positivas de DAPI, lo que indica una penetración eficiente de este tinte en el corazón intacto y en el tejido fibrotico(Figura 4B).
Después de tres enjuagues con PBS, incubar las células con anticuerpos primarios y secundarios y después de lavados finales en PBS y breve enjuague en agua,montar en un medio de montaje con DAPI.
Diapositivas manchadas EdU son contratinción con DAPI, así que en lugar de contar el número total de píxeles en la región de interés, seleccione los píxeles positivos DAPI para calcular el porcentaje de píxeles de la EdU-positivo.
Después de lavar las células con PBS 1 x dos veces por 5 minutos cada uno,tratar las células con DAPI(0.1µg/ mL en PBS 1 x) por 5 min a TA.
También es importante tener en cuenta queHoechst puede ser reemplazado por otro tinte de ADN como DAPI si el MIFC está equipado con el láser de excitación de 405 nm o DRAQ5 si el MIFC está equipado con el láser de excitación de 488 nm y/o 642 nm.
Por último, las celdas capturadas se colocan en una plataforma de cribado integrada y los CTCs se identifican a través de la expresión de EpCAM,CKs y DAPI, mientras que son negativos para CD45.
La ubicación de los núcleos, como se indica por la tinción DAPI indica qué partes del gusano están intactos Cuando los gusanos se someten a un fijador más duro, tal como formaldehído, la morfología del gusano puede distorsionarse(como se ve por la aparición no natural ondulado de la músculos de las figuras 3A-D).
Para ello, después de fijar las células, permeabilizarlos con 0,1% Tritón X-100 durante 30 minutos, lavar x 2 con PBS ymancha con 250 μl de 300 nM DAPI durante 5 minutos protegido de la luz.
El software de análisis utiliza la tinción DAPI no sólo para identificar celdas sino que asigna coordenadas x e y a cada celda y si el multiplex ox tiene una tinción DAPI tenue, mal circunscrita o difusa, la imagen no se puede utilizar más y el multiplex se debe rehacer o intentar rescate y re-manchación de DAPI.
Durante el uso de HCl 4 N en lugar de 2 N mejora la tinción de las formas modificadas de 5mC utilizando HCl 4 N para ladespurinización de ADN no permitiría co-tinción con DAPI, ya que interactúa exclusivamente con el ADN de doble cadena.
Un intento de rescatar el multiplex y el análisis de tejido, el cubreobjetos tal vez eliminado por remojo de la diapositiva en TBST seguido de un paso de microwaving en el búfer de recuperación deantígeno pH 6 con una aplicación adicional de DAPI.
Este protocolo muestra cómo sincronizar los gusanos para el cuarto lugar larvario(L4),realice una calor estrés experimento y conducta tinción DAPI, etanol de la fijación, fijación de acetona y la proyección de imagen en un microscopio de fluorescencia regular.
Otro punto crítico que debe ser mencionado es que a partir del paso de 1,9 en el procedimiento, se debe tener cuidado en la reducción de exposición a la luz de las muestras para prevenirla decoloración de la fluorescencia de la secundaria de anticuerpos y la mancha DAPI nuclear.
Para el número de anticuerpos que se utilizarán, reúna las diapositivas de control adecuadas(es decir,para un multiplex de 7 colores donde un color es DAPI, seleccione 6 diapositivas de control representativaespecíficas específicas del tejido para los otros 6 fluoróforos).
Células HeLa asincrónicas trataron con luciferasa control(panel superior) o cdt1 siRNAs(panel central) o timidina doble sincronizado células HeLa tratadas con siRNA cdt1 durante el 2nd timidina derrubio seguido de fijación a las 10 h después de la liberación(panel inferior)fueron teñidos con DAPI(pseudo-color verde) y el anticuerpo anti-phospho-ɣH2AX(rojo).